一、wyatt多角度激光光散射仪测试前准备
溶剂准备
水相体系：使用超纯水或配制盐溶液(约1L)，加入0.02% NaN₃抑菌剂，用0.22μm滤膜过滤。
有机相体系：采用HPLC级溶剂，同样用0.22μm滤膜过滤(进口试剂根据实际情况处理)。
样品准备
根据分子量范围配制浓度(定量环100μL)：
分子量~1000kDa：0.5-1mg/mL
分子量~100kDa：1-2mg/mL
分子量~10kDa：3-5mg/mL
分子量~5kDa：5-10mg/mL
样品需用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，或通过离心处理去除杂质，尽可能使用流动相配制。
仪器检查
确认电源线连接、电源开关及交换机(适用于网线信号连接)已开启。
二、仪器开机与平衡
开机顺序
依次打开泵、柱温箱(设定温度)、进样系统(手动/自动进样器)、示差或紫外检测器、粘度检测器、多角度激光光散射检测器电源及计算机。
系统冲洗与平衡
开启泵，用超纯水冲洗系统约5分钟(purge泵)，关闭purge阀。
使用最新配制的流动相冲洗系统(有机体系直接使用流动相)。
调节流速至0.1mL/min(若接入粘度检测器，需待其进入工作界面后再开启泵，且IP & DP处于purge on状态)。
若系统中未接入GPC/SEC柱，可直接将流速调至0.1-1.0mL/min(无粘度检测器时，示差检测器purge阀需处于“Purge On”状态)。
若系统中已接入GPC/SEC柱，需以0.1mL/min为起始流速，每1-2分钟提高0.1mL，将流速调整至0.4-0.5mL/min，充分平衡系统。
平衡时间：水相体系建议提前一天冲洗和平衡，第二天开始试验；有机相体系平衡时间一般为3-12小时。
三、测试操作与数据采集
系统平衡与基线稳定
待系统充分平衡后，逐步调整流速至试验流速。
调节示差检测器的Purge阀至“Purge Off”状态，待信号稳定后归零(Zero)。
粘度计(Visco Star)操作方法见附件，待基线稳定。
调用试验模板
在Astra软件中调用相应的试验模板(推荐使用安装工程师创建的Template/Method)。
单针进样：File → New → Experiment from Template/Method → My Templates/methods，选择相应试验模板。
自动进样器进样：File → New → sample set Template/blank sequence → My Templates/method，选择相应试验模板。
进样与数据采集
将进样阀由“load”转至“inject”状态，通过进样系统进样。
Astra软件自动开始采集数据，数据采集完成后，软件根据设定时间停止，或手动停止(Experiment → Stop)。
数据保存
数据采集完成后，依次点击File → Save as...，命名文件并保存。
四、wyatt多角度激光光散射仪数据处理与报告查看
数据处理流程
基线调整：双击Baseline，勾选LS 11(90°角)，调整基线端点，保证基线水平，点击OK/Apply保存。
定峰：移动鼠标至峰的起始点，按住左键拖至峰的落点，松开左键定义峰区域，微调峰区域边缘，点击OK/Apply保存。
dn/dc值输入与归一化：输入dn/dc值并选择normalise(若模板中已使用<50kDa标准样品如BSA、dextran在该体系下归一化，则无需重复操作)。
查看报告：完成上述步骤后，查看报告获取测试结果。
仪器校正(定期进行)
延迟体积校正：校正各检测器间管路体积，确保峰尖位置对齐，通常由安装工程师完成，结果保存于Astra软件模板中。
90°角信号校正(甲苯校正)：获取90°角散射光强度值与电压值的校正系数，推荐每年或每半年一次。
十八角度归一化校正：以90°角为基准，校准其他17个检测器，使用Rg<10nm的标准品(如30kDa的右旋糖酐Dextran或牛血清白蛋白BSA)进行校正。
