高通量动态光散射仪依托微孔板实现一次性批量样品检测，广泛用于纳米颗粒、蛋白聚集体、脂质体等样品粒径与多分散指数筛查。样品浓度是影响数据可靠性的核心因素：浓度过低信号不足，浓度过高易发生多重散射，造成粒径结果失真。本文围绕高通量动态光散射仪，介绍合适浓度区间选择思路以及多重散射抑制实操方案。
一、浓度区间选择原则
DLS 检测依靠颗粒散射光信号计算粒径。浓度偏低时，散射光子数少，信噪比差，数据波动大，重复性不佳；浓度过高，颗粒间距缩小，散射光在到达检测器前被其他颗粒二次散射，产生多重散射效应，测得粒径偏小，分布形态失真。 对于高通量微孔板检测，优先根据样品预估粒径初步定浓度。粒径越小，可使用浓度上限越高；微米级大颗粒体系，散射强度高，需大幅降低浓度。正式批量测试前，设置浓度梯度预实验，找到散射光强落在仪器推荐区间的样品浓度，作为最佳工作区间。
二、多重散射识别方法
多重散射典型现象：光强读数超出仪器上限；平行样粒径偏差明显；稀释样品后复测，粒径数值明显变大。在高通量连续测试中，微孔板不同孔位样品浓度差异大，高浓度孔产生的散射干扰，还可能轻微影响邻近孔检测。发现上述现象，即可判定存在多重散射。
三、多重散射抑制实操技巧
梯度稀释，控制散射光强 当信号超限，采用分散介质逐级稀释，不要一次性大比例稀释，避免稀释带来团聚。稀释介质与原样品分散体系保持一致，pH、添加剂相同，防止颗粒因环境变化发生聚集。稀释后充分混匀，静置去除气泡再放入微孔板。
微孔板加样规范 加样过程避免产生微小气泡，气泡会带来额外散射。控制每孔加样体积，保证液面高度统一，减少光路差异。高浓度样品尽量分散排布在微孔板上，不要集中连片放置，降低孔间光学串扰。
利用仪器自带校正模型 部分高通量动态光散射仪内置多重散射校正算法，在样品浓度偏高时开启辅助校正。注意校正仅能做补偿，不能消除严重多重散射，浓度超标时稀释仍是选择方案。
优化测试参数 适当缩短单次采集时间，减少强光持续采集；重复多次取平均，降低噪声。同时控制样品温度稳定，避免温度变化引发颗粒聚集，间接改变有效颗粒浓度。
四、常见误区规避
盲目追求高浓度以提升检测速度，忽略多重散射风险；稀释时更换分散介质，造成颗粒团聚；微孔板高浓度样品连续排布，引发孔间光学干扰。多重散射不会简单体现在数据偏大或偏小，容易被误判为样品本身粒径分布变化。
小结
高通量动态光散射仪批量测试时，需通过预实验确定合适浓度窗口，将散射光强控制在仪器合理范围。当出现多重散射，优先采用梯度稀释、规范微孔板加样，配合仪器校正模型抑制干扰。合理管控样品浓度，能够提升批量样品粒径、PDI 数据稳定性，适合纳米材料制剂、生物医药纳米混悬液高通量筛选。
