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使用凝胶渗透色谱时要注意这些操作

更新时间:2023-03-07      点击次数:591
  凝胶渗透色谱是一种分离大分子化合物的色谱技术,通常应用于聚合物、蛋白质等在生物、医药领域中的分析和纯化。其原理基于溶液中溶剂分子能渗透到凝胶颗粒内部,但较大分子则无法进入颗粒内部而被阻滞,因而差异化大小分子之间的渗透速率,从而达到分离成分的目的。
  凝胶渗透色谱(GPC)是以有机溶剂为流动相的,用水做流动相的叫凝胶过滤色谱(GLC),两者都是分子排阻色谱。
  用水做流动相的凝胶色谱,通常用来分析蛋白质、多肽(一般用buffer做流动相),如果你想做这方面的分析,成本可能比较高,主要是柱子很贵,比较常见的如TSK的柱子,一般都要上万,柱子比较娇气,很容易损坏。
  凝胶渗透色谱可以用于蛋白质分离、聚合物分离,分离大分子和小分子的混合物等等。在蛋白质分离方面,凝胶渗透色谱可以分离不同分子量的蛋白质。其作用原理是在凝胶列的孔隙中形成一层分子层,与透过孔隙的大分子相互作用,使得大分子在凝胶列中滞留,而较小的分子则在凝胶中渗透更快,从而被更快地分离出来。
  在使用凝胶渗透色谱的过程中,一些要求需要考虑。首先,正确的凝胶选择可以影响分离的效果。例如,根据需要分离的大小范围,选择不同孔径的凝胶;另外,选择适当的缓冲液和pH值,以及一定温度和流速,可以增加分离效应和防止样品的分解或退火。此外,也需要考虑环境安全因素,例如使用比较稀有的防腐剂,使用过程中避免直接接触诸如有机溶剂等易燃易爆物质可能存在的风险。因此,使用凝胶渗透色谱要求具有较高的实验室安全意识和操作技能。
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